Lab № 7 tulajdonságok fehérje színreakciók a fehérjék és aminosavak
Színreakciók fehérjéket Kísérlet 1. biuret reakció.
Biuret reakció - minőség minden, kivétel nélkül fehérjék. és termékek a részleges hidrolízis. amelyek tartalmaznak legalább két peptid kötések.
A módszer elvét. Biuret reakció jelenléte miatt a proteinekben a peptidkötéseket (- CO - NH -), amely lúgos közegben, és így egy réz-szulfát (II) festett vörös-lila színű réz-só-szerű komplexeket. Biuret reakció ad néhány nem fehérjetermészetű anyagokat, mint például a biuret- (NH2-CO-NH-CO-NH 2), oxamid (NH2 CO-CO-NH 2), egy az aminosavak száma (a hisztidin. Szerin. Treonin. Aszparagin).
Biuret reakció glicinnel
Az, hogy a teljesítményt.
Ahhoz, hogy 1 ml 1% fehérje-oldatot adunk hozzá, azonos térfogatú 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot (NaOH) alkálifém-, majd 2-3 csepp 1% -os réz-szulfát (CuSO4). híg, csaknem színtelen oldatot réz-szulfát.
Ha pozitív reakció jelenik lila szín a piros és a kék árnyalat.
Tapasztalat 2.Reaktsiyana „lazán kapcsolódnak a kén.”
A módszer elvét. Ez a reakció, hogy a cisztein és cisztin. Lúgos hidrolízis „lazán kapcsolódnak a kén” a cisztein és cisztin elég könnyen hasítható, ezáltal a hidrogén-szulfid, amely reakcióba lép az alkáli ad nátrium- vagy kálium-szulfid. Hozzáadásával ólom-acetát (II) képződött csapadékot ólom-szulfid (II) egy szürkésfekete.
Az, hogy a teljesítményt.
A pour csövet 1 ml hígítatlan csirke proteint adagolunk 2 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldattal. Az elegyet óvatosan melegítjük (a keveréket dobott).
Ez felszabadítja az ammónia, amely érzékeli a kékülési nedves lakmuszpapír, márkajelzésű a nyitó csövek (ne érintse meg a falakat). A kapott csapadékot feloldjuk enyhe reflux, majd adjunk hozzá 0,5 ml oldatban, ólom-acetát (II). Van egy veszteség a szürke-fekete ólom-szulfid csapadék (II):
A pour csövet 1 ml. hígítatlan csirke fehérjét adunk 2 ml. koncentrált lúgos oldat, hogy még több újraforralót. A forró oldathoz hozzáadunk nátrium-plumbit - képződött sárga-barna vagy fekete színű. (Nátrium Plyumbit a következőképpen állítjuk elő: 1 ml lúgos ólom-acetát-oldatot adunk hozzá cseppenként, amíg az oldódás eredetileg képező csapadék ólom-hidroxid).
A jelenlétében a kéntartalmú aminosavak a fehérje molekula (cisztin, cisztein) ezen aminosavak hasítjuk fokozatosan kén formájában egy ion az oxidációs állapotban - 2, amelynek jelenléte felismerhető és ólomion, kén ionképző oldhatatlan ólom-szulfid, fekete:
PB (CH3 COO) 2 + 2NaOH Pb (OH) 2 + 2 CH3 COONa,
Pb (OH) 2 + 2NaOH Na2 PbO2 + H2 O,
Na2S + Na2 PbO2 + 2H2 O pBS + 4NaOH.
Így az élmény: a következtetést levonni, és levelet az egyenlet a reakció.
3. A tapasztalat ksantoproteinovaya válasz fehérjéket.
A módszer elvét. Ezt a reakciót a kimutatására használt a-aminosavak tartalmazó aromás csoportot. Tirozin, triptofán, fenil-alanin reakciójával tömény salétromsavval reagáltatunk nitro-származék, amelynek sárga elszíneződés. A lúgos környezetben, ezek a nitro-származékok a-aminosavak, így sók, festett narancssárga színű. Zselatin, például, nem tartalmaz aromás aminosavakat, nem ksantoproteinovaya mintát.
Az, hogy a teljesítményt.
Ahhoz, hogy 1 ml 10% -os tojást nem adunk hozzá 0,5 ml tömény salétromsavat fehérje oldat. Ennek eredményeként, fehérje koagulációs, fehér csapadék vagy zavarosság a cső tartalmát. Melegítéskor az oldatot, és a csapadékot színű egy világos sárga színű. Ebben a csapadék majdnem teljesen feloldjuk, a hidrolízis. Lehűtés után 2,1 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldattal (amíg a narancs szín az oldat).
Nézzük meg a mechanizmus a reakció a radikális ksantoproteinovaya tirozin:
Nézzük meg a mechanizmus a reakció a radikális ksantoproteinovaya tirozin:
kék-lila kondenzációs termék
A reakciót ninhidrin használják vizuális észlelését-aminosavak a kromatogramok (papír, vékony-réteg), valamint kolorimetriás meghatározásához a koncentráció aminosavak a intenzitása elszíneződése a reakciótermék.
A reakció termékét tartalmazza az összetételében csoport (R) a kezdeti aminosav, ami a különböző színek: kék, piros, stb vegyületek eredő reakciók aminosavak ninhidrinnel.
Jelenleg ninhidrin reakció széles körben használják a nyitó az egyes aminosavak, valamint azok összegének meghatározása.
Az, hogy a teljesítményt.
A pour csövet 1 ml 1,10% -os híg oldatával csirke tojásfehérje, és 2,1 ml 1% Ninhidrin acetonban. A tartalma a kémcsőbe, és keverjük 2-3 percig óvatosan melegítjük vízfürdőn, amíg a kék-ibolya színű, jelezve a jelenlétét α-aminosavak a fehérje.
Így az élmény: a következtetést levonni, és levelet az egyenlet a reakció.
6. A tapasztalatok Sakaguchi-reakciót.
A módszer elvét. Ez a reakció az aminosav arginin kölcsönhatásán alapul arginin és a-naftol jelenlétében egy oxidálószer. A mechanizmus még nem teljesen tisztázott. Úgy tűnik, a reakciót az alábbi egyenlet szerint:
Mivel kinonimin származékok (ebben az esetben a naftokinon), amelyben a hidrogén az iminocsoport -NH- helyébe egy alkil- vagy aril-csoport, mindig színezett sárga és piros színű, úgy tűnik, hogy narancs-vörös színű során az oldat a reakció előfordulása miatt Sakaguchi nevezetesen naftohinonimina származékot. Nem kizárt azonban, a valószínűsége képződését több komplex vegyület miatt további oxidációját a megmaradó NH-csoport, az arginin-maradékot, és a benzolgyűrű egy-naftol:
Az, hogy a teljesítményt.
2 ml. 1% híg oldatával tyúktojás fehérje hozzáadunk 2 ml. 10% nátrium-hidroxid (NaOH) és néhány csepp 0,2% -os alkoholos oldat α-naftol. A csövek tartalmát jól összekeverjük. Ezután öntsünk 0,5 ml. nátrium-hipobromit (NaBrO) vagy nátrium-hipoklorit (nátrium-hipoklorit - NaOCI), keverjük. Azonnal úgy tűnik, piros, fokozatosan növekvő festéssel.
Azonnal adjunk hozzá 1 ml 40% -os oldat karbamid, hogy stabilizálja a gyorsan fejlődő narancssárga-vörös színű.
Ez a válasz jellemző vegyületek a maradékot tartalmazó guanidin
és jelzi a protein jelenléte a molekula, aminosav-arginin:
NH = C-NH - (CH 2) 3-CH-COOH